您好!歡迎訪問銘修(上海)生物科技有限公司網站!
全國服務咨詢熱線:

18930233920

當前位置:首頁 > 技術文章 > 關于大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞的培養你都了解多少

關于大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞的培養你都了解多少

發表時間:2021-09-27  |  點擊率:180

    大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞系來自能移植的雄性大鼠shen上腺嗜鉻細胞瘤。這些細胞表達神經生長因子(NGF)受體。NGF可誘導產生神經表型。這些細胞不合成shen上腺素。

    大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞培養操作規程:

    一.培養基及培養凍存條件準備:

    1)準備DMEM培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。

    2)培養條件:氣相:空氣:95%;二氧化碳:5%,溫度:37攝氏度,培養箱濕度:70%-80%。

    3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

    二.細胞處理:

    1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

    2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

    對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

    1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

    2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的培養基終止消化。

    3.輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養液后吹勻。

    4.移入到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中或含有14ml培養基的T-75培養瓶中培養。

    注:第一次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。

    3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。

    下面T25瓶為例;

    1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml完全培養基終止消化,可使用血球計數板計數。

    2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。

    3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
掃一掃,關注微信
地址:上海市楊浦區武寧路269號 傳真:86-021-55825868
©2022 銘修(上海)生物科技有限公司 版權所有 All Rights Reserved.  備案號:滬ICP備16032190號-1
一代女皇则天a级艳片,夜夜夜夜曰天天天天拍国产,亚洲av日韩aⅴ无码电影,野花社区www在线