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你知道精漿檸檬酸定量試劑盒的正確操作步驟嗎

發表時間:2021-09-10  |  點擊率:214

    精漿檸檬酸定量測定對于判斷精子質量有一定的作用。精漿檸檬酸定量試劑盒的測定原理是檸檬酸與吲哚在酸和加熱的情況下形成復合物,該復合物通過96孔板測定儀或分光光度計在470nm處測定吸光值,同時做檸檬酸的標準曲線,通過標準曲線來計算精液中檸檬酸的具體含量,即對檸檬酸進行定量檢測。

    精漿檸檬酸定量試劑盒的操作步驟(僅供參考):

    1、制備標準曲線:用ddH20稀釋Citrate標準(2.24mM)。取離心管加入Citrate標準(2.24mM)和150μl ddH20混合,即獲得Citrate標準;取離心管加入Citrate標準(1.12mM)和150μl ddH20混合,即獲得濃度為0.56mM的Citrate標準,依次對倍稀釋,分別獲得濃度為0.28mM和0.14uM的Citrate標準。

    2、制備樣本:離心精液樣本,取上層精漿置于新的離心管,儲存于-20℃待檢。

    3、 樣本預處理:解凍去除精子的精漿,在混旋器上充分混勻。取若干新的離心管,每管加入ddH20,用正向置換型加樣器加入混勻好的精漿,即獲得的預處理樣本,每個精漿樣本應稀釋作為復測。

    4、 樣本檢測: ① 脫蛋白:向預處理樣本中加入Protein Dilution A和B,混勻。 ② 離心:室溫放置,離心。 ③ 上樣:取上清置轉移至離心管中。同時取新離心管加入ddH20作為空白對照,取新的離心管分別加入Citrate標準,即濃度為2.24mM、1.12mM、0.56mM、0.28mM、0.14mM的標準品個2份。 ④ 顯色反應:向每管樣本中加入Indole Developer,混勻。向每個樣本中加入濃鹽酸,封口,在通風櫥中充分混勻,50℃水浴中加熱,混勻,冰水冷卻。 ⑤ 測OD值:在通風櫥中用正向置換型加樣器將250μl液體小心移入96孔板中,以ddH20作為空白管調節零點,用酶標儀或96孔讀數板在波長下讀取結果。
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